Estrategia para perfilar el repertorio de receptores de células T beta

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Disección de la eficacia de una técnica de amplificación rápida de extremos de ADNc en 5′ (5′-RACE) para perfilar el repertorio de receptores de células T beta
La secuenciación profunda de los genes del receptor de células T (TCR) es extremadamente eficaz para perfilar el repertorio inmunitario. Para preparar una biblioteca de secuenciación de TCR, se utiliza ampliamente la respuesta en cadena de la polimerasa multiplex (mPCR) y es extraordinariamente agradable para el ambiente.
Es decir, la mayoría de los productos mPCR abarcan el mundo importante para el reconocimiento de antígenos, lo que además significa una recombinación V(D)J frecuente. Sin embargo, la PCR multiplex puede sufrir el sesgo del cebador. Una alternativa prometedora es el 5′-RACE, que evita el sesgo de los cebadores al hacer uso de un solo par de cebadores.

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En la información de 5′-RACE, sin embargo, se ha observado recombinación V(D)J no regular (por ejemplo, secuencias TCR y nunca utilizando una parte del gen V) y la frecuencia varía (30-80%) entre los análisis.
Esto sugiere que la explicación o el aprendizaje de la forma de recortar las secuencias de TCR no regulares no es sin embargo bien conocida por el vecindario científico.
Aunque es posible tomar un lugar de la puesta en marcha mediante la evaluación de los protocolos de 5′-RACE, cautelosa afirmación experimental es necesaria y tal estudio científico sigue siendo no obtenible.
Aquí mismo, examinamos el protocolo 5′-RACE de un equipo industrial y demostramos cómo una modificación elevó la fracción de secuencias TCR-β regulares a >85%. Además, encontramos una fuerte correlación lineal entre la fracción de fragmentos de ADN rápidos y la proporción de secuencias TCR-β no regulares, lo que indica que la presencia de fragmentos de ADN rápidos en toda la biblioteca era el primer propósito detrás de las secuencias TCR-β no regulares.

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En consecuencia, la eliminación exhaustiva de los fragmentos de ADN rápidos de una biblioteca 5′-RACE es el factor esencial para una eficacia informativa extrema. Abogamos extraordinariamente por realizar un análisis de la dimensión de la fracción antes de la secuenciación, y la fracción de fragmentos de ADN rápidos podría utilizarse para estimar la proporción de secuencias de TCR no regulares. Como la secuenciación profunda de los genes TCR sigue siendo comparativamente cara, la administración de la buena calidad tiene que valer la pena.

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Descubrimiento de la evaluación: Enorme familia de genes de la fosfoenolpiruvato carboxilasa en toda la planta del metabolismo ácido de las crasuláceas Kalanchoepinnata (Crassulaceae) caracterizada por el análisis de la secuencia parcial del ADNc

Se han aislado clones que codifican una secuencia de ADNc de 1100 pb de la fosfoenolpiruvato carboxilasa (PEPC) de la planta constitutiva del metabolismo ácido de las crasuláceas (CAM) Kalanchoepinnata (Lam.) Pers. mediante la respuesta en cadena de la transcripción inversa-polimerasa (RT-PCR) y se han caracterizado mediante el análisis de polimorfismo de dimensión de fragmentos de restricción y la secuenciación del ADN.

Se han recuperado siete isógenos distintos de PEPC, cuatro en las hojas y tres en las raíces (números de acceso del EMBL: AJ344052-AJ344058). Las comparaciones de similitud de secuencias y los cálculos de unión de vecinos a distancia separan las siete isoformas de PEPC en dos clados, uno de los cuales incluye las tres PEPCs presentes en las raíces. El segundo clado incluye las cuatro isoformas actuales en las hojas y se divide en dos ramas, una de las cuales incluye dos PEPCs más asociadas con las isoformas CAM descritas anteriormente.

De estas dos isoformas, sin embargo, sólo una exhibió una expresión apreciable en las hojas que realizan CAM, sin embargo no en las hojas muy jóvenes, que no exhiben CAM, lo que sugiere que esta isoforma codifica un PEPC específico de CAM. Los cálculos de la secuencia de la proteína aconsejan que todos los isógenos son aparentemente derivados de un gen ancestral ordinario, presumiblemente por eventos de duplicación genética en serie. Según nuestra información, esta es básicamente la identificación más completa de una familia de genes PEPC de una planta CAM, y el número perfecto de isógenos PEPC reportados para cualquier planta vascular hasta este punto.

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Análisis molecular de un ADNc inducido por el estrés que codifica la situación de iniciación de la interpretación, eIF1, del pariente silvestre del arroz tolerante a la sal, Porteresiacoarctata

El análisis de la respuesta de las plantas al estrés es una vía vital para la invención de genes que confieren tolerancia al estrés. La síntesis de proteínas es muy delicada ante el estrés salino y las proteínas que intervienen en este curso son también un importante determinante de la tolerancia a la sal.

La planta halófila, PorteresiacoarctataTateoka, es un pariente en profundidad de Oryzasativa L., y tiene la facilidad de resistir los cambios repentinos a lo largo de la salinidad del suelo. El ADNc de la situación de iniciación de la interpretación 1 (PceIF1) se aisló de las hojas de P. coarctata que habían sido sometidas a un remedio de alta salinidad (150 mm de NaCl). Un estudio de expresión confirmó que la abundancia de los transcritos de eIF1 se elevó hasta un máximo de 5 días después de la inducción del estrés, tras lo cual disminuyó a rangos muy similares a los de las hojas de los cultivos de administración (no salados).

100 BP DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-100BP CORNING
1 KB DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-1KB CORNING
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.1 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.25 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-5 ApexBio

Este gen fue además regulado en terapias con ácido abscísico (ABA) y manitol, lo que sugiere que su inducción se debe a la impresión de déficit hídrico de la sal extrema. Nuestro análisis confirmó que los rangos de expresión de los transcritos de eIF1 podrían constituir un indicador útil para monitorear un mecanismo de respuesta al estrés que opera en todas las hojas de P. coarctata.

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Valor pronóstico de la sobreexpresión de las enzimas relacionadas con el metabolismo de los ácidos grasos en el carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello

La reprogramación del metabolismo vital celular, equivalente al metabolismo de los lípidos, es un indicador del carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (SCCHN). Sin embargo, no está claro si la expresión de las proteínas relacionadas con la oxidación de los ácidos grasos (FAO) influye en la supervivencia del SCCHN. Nuestro objetivo es investigar la expresión de la enzima relacionada con la FAO y resolver su correlación con las variables clinicopatológicas en las víctimas del SCCHN. Se llevó a cabo un análisis inmunohistoquímico (IHC) de la expresión de proteínas relacionadas con la FAO, junto con la carnitina palmitoiltransferasa 1 (CPT1), la familia de la acil-CoA deshidrogenasa y la sintasa de ácidos grasos (FAS), utilizando microarrays de tejidos de 102 tumores de SCCHN resecados.

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Next Advance
Column Packing Kit
Next Advance

Las expresiones se categorizaron en respuesta a las puntuaciones de IHC, y se determinó la afiliación estadística con las partes clinicopatológicas. La expresión de la acil-CoA deshidrogenasa de cadena larga (LCAD), que era asequible, tenía una función defensiva en la dirección de la muerte relacionada con el cáncer (cociente de riesgo (HR) ajustado, 0,2; intervalo de confianza (CI) del 95%, 0,05-0,87) tras el ajuste de las covariables.

La edad y el estadio médico siguieron siendo predictores imparciales de la supervivencia (HR ajustado, 1,75; IC del 95%, 1,22-2,49 para la edad; HR ajustado, 14,33; IC del 95%, 1,89-108,60 para la enfermedad en estadio III/IV). La sobreexpresión de la acil-CoA deshidrogenasa de cadena media y del FAS se correlacionó con el estadio superior del tumor (T3/T4); sin embargo, ninguna de estas partes había sido un predictor imparcial de la supervivencia. Muchas de las enzimas relacionadas con la FAO habían sido reguladas al alza y la sobreexpresión de la LCAD tenía una impresión defensiva sobre la supervivencia total en las víctimas del SCCHN superior. La expresión de las enzimas relacionadas con la FAO podría tener una impresión pronóstica sobre los resultados de supervivencia en el SCCHN.

Custom development of ELISAs for other species or antibody isotypes not listed in the catalog. Custom testing of samples for IgG/IgM/IgA or total (IgG+IgM+IgA)
000-CUS Alpha Diagnostics
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002 Cusabio
Alpha-bungarotoxin, CF405s
00002-100ug Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium
Alpha-bungarotoxin, CF680r
9-00003 Biotium

Fuentes :

  1. Gentaur
  2. NCBI

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