Ensamblaje en levadura de clones de ADNc infecciosos de coronavirus mediante una línea de genómica sintética

Las estrategias de genética inversa basadas en Escherichia coli y en el virus vaccinia han sido ampliamente utilizadas para la manipulación e ingeniería de los genomas de coronavirus. Estas estrategias, sin embargo, presentan muchas limitaciones y suelen ser poderosas para averiguar en una metodología eficazmente programada para (re)aumentar los virus. En este capítulo, presentamos un modelo de nueva plataforma de genética inversa frecuente para el ensamblaje y la ingeniería de cDNAs infecciosos de longitud completa utilizando la clonación de recombinación asociada a la transformación basada en la levadura.

DNA
MBS6507400-005mg	MyBiosource
DNA
MBS6507400-5x005mg	MyBiosource
4-Amino Biphenyl DNA (4-AMBP DNA, 4-Aminobiphenyl DNA)
MBS600356-01mL	MyBiosource
4-Amino Biphenyl DNA (4-AMBP DNA, 4-Aminobiphenyl DNA)
MBS600356-5x01mL	MyBiosource
T4 DNA Ligase (T4 DNA) Enzyme
abx073011-25g	Abbexa

Este novedoso método de ensamblaje no sólo termina en ADNc infecciosos de longitud completa de coronavirus clonados en la levadura Saccharomyces cerevisiae, sino que además fomenta y acelera la manipulación de sus genomas.

Dicha plataforma está ampliamente relacionada para el vecindario científico, como resultado de que no requiere ningún equipo específico y puede muy bien llevarse a cabo en un entorno de laboratorio extraño. El protocolo descrito puede adaptarse a casi todos los coronavirus reconocidos o en aumento, desde el coronavirus del síndrome respiratorio del Oriente Medio (MERS-CoV).

Protein-Export Protein SecB (SecB) Protein

Abbexa

Protein-Export Protein SecB (SecB) Protein

Abbexa

Protein-Export Protein SecB (SecB) Protein

Abbexa

Paraffin Wax

Toronto Research Chemicals

Paraffin wax pellets

EWC Diagnostics

Paraffin wax pellets

EWC Diagnostics

Paraffin wax Pellets

EWC Diagnostics

Paraffin wax Pellets

EWC Diagnostics

Síntesis de clones infecciosos de ADNc del virus del mosaico de la soja e identificación intencionada de un aminoácido clave en todo el supresor de silenciamiento Hc-Skilled

El virus del mosaico de la soja (SMV), que pertenece a los Potyviridae, provoca reducciones muy importantes en el rendimiento de la soja y en la calidad superior de las semillas. En este estudio, todos los clones infecciosos libres de etiquetas y que contienen la proteína fluorescente no experimentada (GFP) para el estrés del SMV N1 se han construido mediante el ensamblaje de Gibson y con el sistema de recombinación homóloga de la levadura, respectivamente.
Todos los clones infecciosos son aplicables para la agroinfiltración en el hospedador modelo benthamiana y presentan una fuerte infectividad para el hospedador puro soja y un número de otras especies de leguminosas completamente diferentes. Todos los clones infecciosos se han transmitido por semilla y han provocado indicadores típicos del virus en las semillas y en los cultivos de progenie. Se utilizó el clon infeccioso SMV-GFP para observar el rendimiento de los aminoácidos clave a lo largo del supresor del silenciamiento componente-proteína (Hc-Skilled).

MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit

Bioingentech

MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit

Bioingentech

PCR Mix

Biochain

PCR-EZ D-PCR MASTER MIX

Bio Basic

MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit

Bioingentech

Entre los doce mutantes de sustitución de aminoácidos, la coexpresión del mutante 2 -con una sustitución Asparagina→Leucina en el lugar 182 del motivo FRNK (Phe-Arg-Asn-Lys)- atenuó los indicadores virales y alivió el retraso del progreso del huésped introducido por el SMV.
Además, el mutante Hc-Prom2 confirmó una oligomerización más fuerte que el Hc-Skilled de tipo salvaje. En conjunto, los clones infecciosos del SMV podrían ser útiles para el análisis de las interacciones huésped-SMV y para la caracterización de genes útiles en la soja y en las especies de leguminosas relacionadas, especialmente mediante el uso de las propiedades de transmisión de las semillas. Además, el clon infeccioso SMV-GFP facilitará incluso el análisis útil de cada uno de los genes del virus y del huésped en un sistema de expresión transitoria de benthamiana.

Rat Cholesterol ELISA ELISA
E01A11128	BlueGene
Goat Cholesterol ELISA ELISA
E01A46041	BlueGene
Mouse Cholesterol ELISA ELISA
E01A19869	BlueGene
Human Cholesterol ELISA ELISA
E01A2368	BlueGene
Sheep Cholesterol ELISA ELISA
E01A98335	BlueGene

Perfiles de genes tolerantes al Cd en arroz mediante el uso de cribado de supervivencia de bibliotecas de cDNA basadas en levadura

La bioacumulación de cadmio (Cd) en los cultivos y en la siguiente cadena alimentaria ha suscitado una gran preocupación. Sin embargo, los mecanismos moleculares subyacentes de la tolerancia al Cd de las plantas siguen siendo aclarados desde el punto de vista de los nuevos genes candidatos.

Rat Cholesterol ELISA ELISA
E01A11128	BlueGene
Goat Cholesterol ELISA ELISA
E01A46041	BlueGene

Aquí describimos una técnica extraordinariamente agradable para la determinación preliminar de los genes tolerantes al Cd del arroz mediante el uso de la biblioteca de cDNA basada en la levadura, mezclada con el método de secuenciación de alto rendimiento. Alrededor de 690 isoformas de genes han sido reconocidos como candidatos a tolerar el Cd mediante esta técnica de escopeta.

Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit

LF-EK60047

Human IL-17E ELISA Kit ELISA kit

E22-HC180.48

Human IL-17E ELISA Kit ELISA kit

E22-HC180.96

Entre los muchos genes tolerantes al Cd reconocidos, una gran cantidad de lecciones de genes que se remontan al inhibidor de BAX (BI), componentes de transcripción NAC y componentes de alcalinización rápida (RALFs) han sido de particular curiosidad, y su realización de la tolerancia al Cd se validó adicionalmente por medio de la expresión heteróloga, que instó a que SNAC1, RALF12, OsBI-1 puede conferir la tolerancia al Cd en la levadura y las hojas de tabaco.

En lo que respecta a los genes implicados en el transporte de iones, cabe destacar la proteína isoprenilada HIPP42, espacio asociado a metales pesados (HMAD) y tolerante al Cd. Una mayor elucidación de estos genes asociados a la tolerancia al Cd en el arroz redundará en acciones agrícolas.

10 mm Diameter Solid Titanium Tip
0-120-0009	Biologics
13 mm Diameter Tapped Titanium Tip
0-120-0010	Biologics
13 mm Diameter Solid Titanium Tip
0-120-0011	Biologics
19 mm Diameter Tapped Titanium Tip
0-120-0012	Biologics
19 mm Diameter Solid Titanium Tip
0-120-0013	Biologics

Transcriptómica unicelular de células inmunitarias: Aislamiento celular y período de biblioteca de cDNA para scRNA-Seq

La secuenciación de ARN de una sola célula (scRNA-seq) permite un análisis completo del transcriptoma de células individuales específicas mediante la secuenciación de próxima generación. ScRNA-seq proporciona una técnica imparcial para investigar la heterogeneidad y la dinámica celular de diversas estrategias naturales, junto con el sistema inmunitario. La optimización de los procedimientos técnicos llevados a cabo antes del análisis de RNA-seq es esencial para el éxito de un experimento de scRNA-seq.

Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit

Abfrontier

Human IL-17E ELISA Kit ELISA kit

EnoGene

Human IL-17E ELISA Kit ELISA kit

EnoGene

Aquí mismo, se describen tres procedimientos experimentales primarios: (1) el aislamiento de las células T CD8a+ inmunitarias a partir de tejido murino primario, (2) el conocimiento de las bibliotecas de ADNc de una sola célula utilizando el controlador de cromo 10× Genomics y la respuesta de 3′ de una sola célula de cromo, y (3) la administración de la calidad superior de la biblioteca de ADNc. En este protocolo, las células T CD8a+ se aíslan a partir de tejido del bazo murino, sin embargo, cualquier tipo de célula de la curiosidad puede muy bien ser enriquecido y utilizado para la célula única biblioteca de ADNc know-how y posterior RNA-seq experimentos.

10 mm Diameter Solid Titanium Tip
0-120-0009	Biologics
13 mm Diameter Tapped Titanium Tip
0-120-0010	Biologics
13 mm Diameter Solid Titanium Tip
0-120-0011	Biologics
19 mm Diameter Tapped Titanium Tip
0-120-0012	Biologics

El tren anticancerígeno para los análogos basados principalmente en bumetanida mediante la concentración en la enzima anhidrasa carbónica humana positiva para la membrana asociada al tumor La anhidrasa carbónica humana unida a la membrana (hCA) IX se denomina a menudo un marcador de hipoxia tumoral y un problema pronóstico dentro de muchos cánceres humanos. Al no ser detectado en la mayoría de los tejidos convencionales, hCA-IX implica la creación farmacoterapéutica de resultados hostiles fuera del objetivo disminuidos. Evaluamos el posible tren anticanceroso de análogos basados en bumetanida para inhibir el tren enzimático hCA-IX y la proliferación celular de dos cepas celulares seguras de la mayoría de los cánceres, particularmente el carcinoma de riñón (A-498) y el carcinoma de células escamosas de vejiga (SCaBER). Los análogos de bumetanida inhiben con éxito el propósito hCA-IX en un tren nanomolar bajo (IC 50 = 4.4-23.7 nM) y tienen un perfil de selectividad exquisito (SI = 14.5-804) en relación con la siempre presente isoforma hCA-II.

Además, el análisis de acoplamiento molecular proporcionó información sobre la relación estructura-actividad de los compuestos y la unión preferencial de ligandos engorrosos de tamaño pequeño junto con selectivos en la ruta de la bolsa hCA-IX. En particular, el subproducto 9c del 2,4-dihidro-1,2,4-triazol-3-tión mostró un tren inhibidor HCA-IX pronunciado y un espectacular tren antiproliferativo en células oncogénicas de carcinoma de riñón A-498 y se está considerando como un candidato prometedor contra el cáncer. El análisis futuro tendrá como objetivo optimizar este compuesto para afinar su tren anticancerígeno, así como para encontrar su potencial a través del análisis preclínico in vivo.

10 mm Diameter Solid Titanium Tip

Biologics

13 mm Diameter Tapped Titanium Tip

Biologics

13 mm Diameter Solid Titanium Tip

Biologics

19 mm Diameter Tapped Titanium Tip

Biologics

Fuentes :

1. Gentaur
2. NCBI